本发明公开了一种用于检测伪狂犬病毒抗体的小片段gG抗原、试剂盒以及检测伪狂犬病毒抗体的方法。该小片段gG抗原在大肠杆菌中主要以可溶的形式表达，表达产物用间接ELISA分析具有免疫原性，且表达产物不需变性、复性处理，提纯简便易行。以初提纯的表达产物作为抗原，可以检测样品中的gG抗体，可以鉴别gG基因缺失疫苗免疫猪和感染野毒的血清学阳性猪，敏感性强、特异性高、操作简便，适合于临床大量检测。